酶聯免疫吸附測定法（ELISA）是蛋白定量金標準，靈敏度高（可達 pg/mL）、特異性強、重複性好，且操作簡單，檢測儀器易獲得（酶標儀），是免疫學中的常規手段。

但是 ELISA 也是一種細節決定成敗的實驗，瞭解操作中的常見問題可以有效避免踩坑，使實驗能夠達到事半功倍的效果，早日獲得科研結果。

火眼金睛

5 招教你判斷試劑盒真假

買對 ELISA 試劑盒是成功的第一步。進口 ELISA 試劑盒超貴，國產的各種品牌良莠不齊，一旦買到假的試劑盒，拿到錯誤的實驗結果，後果不堪設想。那應該如何判斷試劑盒真假，下面幾招請牢記～

購買前

向廠家索要或從其網站下載說明書，查詢 ELISA 的效能指標：準確度（加標回收率、稀釋線性）、精密度（板內差、板間差）、靈敏度、樣本值、特異性、校準等。一般來說，除了校準不一定每份說明書都有外，其餘的指標一般都需要羅列（部分樣本需要高倍稀釋，可能沒有準確度這個指標）。

如果無法提供這些效能指標，則說明該試劑盒可能是假貨，或者試劑盒開發過程不夠科學嚴謹，有可能無法檢測出真實的樣本值。

對於 ELISA 指標齊全，種屬多樣（特別是不常見種屬）的商家，可先去搜索想要購買指標是否有抗體出售，如果抗體都難以買到，則 ELISA 有可能是假貨，需要小心謹慎。

將「廠家名」、「ELISA」和「假貨」等關鍵詞在網上搜索，有的網站或論壇如丁香園等會有打假曝光臺。

購買後

利用干擾實驗即可鑑別 ELISA 試劑盒是否可檢測目的抗原。

如果購買了兩盒同一公司的 ELISA 試劑盒 A 和 B，

利用交叉實驗即可鑑別 ELISA 試劑盒是否造假。

心細如髮

4 表掌握 ELISA 操作常見問題及解決辦法

在確定 ELISA 試劑盒為真的情況下，應嚴格按照說明書進行操作，

比如使用乾淨容器和要求的水質配置緩衝液等，主要注意要點如下：

移液操作時，酶標板孔中要垂直懸空加入液體，避免加到孔壁上。

實驗前將所有試劑平衡至室溫。

標準品粉末溶解前需要先短暫離心，使管內標準品全部集中在管底。

實驗要做復孔，減少誤差。

振盪孵育，加強反應。

每次洗板必須將洗液棄乾淨。

酶標儀檢測前預熱，雙波長檢測。

注意顯色判斷，適時終止。

但有時即使完全按照說明書操作，仍然會出現諸多問題，可以按照問題類別逐一進行排查。

1. 白板

如果顯色完成後，肉眼可見整板沒有顯示反應，可能原因及應對方法詳見表 1。

表1 異常白板排查及應對方法

2. 花板

花板是指空白、陰性、陽性對照以及室內質控孔結果正常，而標本孔的吸光度（OD 值）卻明顯偏高，可能原因及應對方法詳見表 2。

表 2 異常花板排查及應對方法

3. 標曲不佳

ELISA 實驗中標準品進行了倍比稀釋，但標準曲線最高點 OD 值偏高或偏低，且沒有梯度，可能原因及應對方法詳見表 3。當然，也會存在酶標板封閉不足、本底不穩定的情況。

表 3  標曲不佳排查及應對方法

4. 標曲正常，樣本吸光值極低

標曲正常，但是樣本讀值極低，甚至有低於空白孔的情況，可能原因及應對方法詳見表 4。

表 4 樣本讀值極低排查及應對方法

此外，

如果肉眼觀察酶標板顯色正常，而上機所測 OD 異常，可檢測酶標儀引數的設定以及濾光片是否匹配。

洗滌液多為非離子型中性緩衝液，既含有親水集團，也含有疏水基團，可以使吸附在酶標板上的蛋白解離而溶於水中，去除非特異性吸附物質，但是濃度太高時，會引起包被抗體脫落。所以需要正確稀釋。同時應該用高質量的純淨水稀釋，不能引入別的離子，以免對抗原抗體結合和酶促反應產生影響。

寫了這麼多，記不住怎麼辦呢？其實只有五點：

1。 選擇品牌試劑盒比如聯科生物

2。 花板

3。 標曲不標準，主要是最高點飛來飛去不穩定

4。 白板

5。 標曲正常，樣本吸光值極低

再簡單五個字就搞定了：

蓮花飛白堤

是不是有點西湖的意境了？蓮諧音聯，聯科生物坐落於杭州，專注於 ELISA 檢測試劑的生產和研發，提供高品質的 ELISA 檢測產品和服務，依託在生物試劑領域近 20 年的技術積累，為客戶提供高效的檢測服務。

聯科生物的 ELISA 多重驗證實驗不但是試劑研發成本中的重要組成部分，而且驗證指標越多，對工藝要求越嚴格。

聯科 ELISA 試劑盒有通用和高敏兩款產品供選擇，價格親民，大量現貨能夠在 3 日內發貨。

內容策劃：武妙蘭

內容稽核：周文

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