靶向PD-1/PD-L1通路的免疫檢查點抑制劑的出現，給癌症的臨床治療帶來了革命性的變化［1］。
不過PD-1抗體的抗癌機制，並不完全為人所知
。
其中一個非常關鍵的問題是，PD-1抗體的抗癌效果，
究竟是依賴於在治療前就存在於腫瘤中的浸潤淋巴細胞的再啟用？
還是PD-1抗體治療之後，腫瘤外的殺傷T細胞進入腫瘤抗癌
？這個問題，目前也是不清楚的［2，3，4］。
如果把這個問題搞清楚的話，醫生就可以多一種手段判斷患者是不是適合免疫治療了。
來自斯坦福大學醫學院的Howard Y。 Chang教授，Anne Lynn S。 Chang副教授和Ansuman T。 Satpathy助理教授的聯合團隊想弄明白這個重要的問題。
從左到右依次為：Ansuman T。 Satpathy，Anne Lynn S。 Chang和Howard Y。 Chang（來源：斯坦福大學醫學院）
他們從接受PD-1抗體治療前後的基底細胞癌（BCC）或鱗狀細胞癌（SCC）患者身上採集了
79046個細胞
（包括癌細胞和各種免疫細胞），然後給這些細胞分別做了單細胞RNA測序和T細胞受體測序
。
這工作量簡直是沒誰了，得花多少錢呀
不止奇點糕覺得貴（biorxiv。org）
基於單細胞RNA測序結果，研究人員將所有的細胞分成19個小組，惡性癌細胞兩個，T細胞6個，腫瘤基質細胞4個，骨髓細胞3個，B細胞3個和自然殺傷（NK）細胞一個。而且，這個基於RNA測序結果的免疫細胞分類，
與之前的研究結果相一致[5]。
這也說明，這個測序和分類結果是沒有問題的
。
快來一起認識下這19個小組
此外，來自不同患者的免疫細胞也都聚集在一起，表明
不同患者腫瘤微環境中的免疫細胞型別也基本是一致的
。而仔細分析3548個癌細胞的表達譜，很容易發現，
不同患者之間腫瘤異質性非常大，這也與之前的研究結果一致
［6，7］。
當然了，他們還仔細分析了癌細胞之間的共同標誌物，以及表達差異較大的基因，都收穫不小。不過，這些都不是本研究的重點。
重點內容是免疫細胞，尤其是浸潤性免疫細胞，以及治療前後的變化，以瞭解克隆性T細胞對PD-1抗體治療的反應。
研究人員做的第一件事兒就是把所有的
33106個腫瘤浸潤性T細胞
做了個更細緻的分類，包括表達CD4的調節性T細胞（Treg）細胞，濾泡輔助性T（TFH）細胞，T輔助細胞17（TH17）細胞；以及表達CD8的幼稚細胞，記憶T細胞，效應記憶T細胞，活化T細胞，慢性活化/耗竭T細胞（後文統一稱為
耗竭T細胞
），中度耗竭/活化細胞。為了研究清楚，這個分類可真是仔細啊。
再來認識下T細胞的9個分類
初步分析發現，
在PD-1抗體治療之後，濾泡輔助性T細胞，以及活化，耗竭和耗竭/活化的CD8陽性T細胞的頻率增加
。
而且研究人員還觀察到，PD-1抗體治療之後，
增加的耗竭T細胞會表現出慢性啟用，T細胞功能障礙和腫瘤反應性的基因特徵，與所有其他CD8陽性T細胞相比，耗竭T細胞的克隆水平明顯更高
。
這些結果與之前的研究基本一致，表明PD-1抗體主要影響CD8陽性T細胞［8，9］。
耗竭性T細胞克隆性增強
那麼，對於同一個腫瘤組織而言，治療前的T細胞型別與治療後的T細胞型別有沒有什麼差別呢？
分析結果讓研究人員感到意外。
雖然他們
觀察到記憶T細胞和效應T細胞頻繁轉換為活化狀態，但是治療前的耗竭T細胞卻沒有變成治療後的非耗竭表型
。這表明，即使在PD-1抗體治療後，
已經耗竭的腫瘤浸潤T細胞也很難變成活化狀態了
。
真可謂，“
一入腫瘤深似海，抗癌從此不可能
”。
此外，研究人員還觀察到一個有趣的現象，
PD-1抗體治療後才出現的耗竭性T細胞表現出了新的TCR特異性
，而且他們也證實，這種治療前後的抗原特異性差異不是取樣時間導致的，而
是與PD-1抗體的治療有關
。這也表明，PD-1抗體治療，可能會促進T細胞具備新的腫瘤抗原特異性。
本研究流程（亂入一張圖）
那PD-1抗體處理之後的出現的活化T細胞是哪裡的耗竭T細胞轉化而來？
外周血
是他們想到的第一個來源。
為了分析外周血中是否存在新發現的腫瘤浸潤性T細胞，研究人員給5名患者的10份血液樣品做了TCR測序，
發現35.5%新腫瘤浸潤性T細胞可以在PD-1抗體治療後的外周血中找到，而在治療前的外周血中只能找到11.8%的新腫瘤浸潤性T細胞，不過
治療前的腫瘤裡面卻沒有新腫瘤浸潤性T細胞
。
外周血中的分佈
這個結果也表明，
採集外周血監測克隆腫瘤特異性T細胞對PD-1抗體治療的響應或許是可行的
。
研究人員還用26016個鱗狀細胞癌患者的腫瘤浸潤性T細胞單細胞測序資料，證實了前面的發現。這表明，
這種現象可能普遍存在於各種腫瘤中
。
總的來說，與“冷”腫瘤相比，
“熱”腫瘤之所以響應PD-1抗體的治療，可能是由於“熱”腫瘤自身的特質，讓它能夠不斷吸引新T細胞進入
［10］，
而不是重新啟用已有的腫瘤浸潤性T細胞
。
無論如何，這個研究讓我們對免疫檢查點抑制劑的作用機制有了新的認知，這對臨床治療和療效的檢測都有一定的價值和意義。如果能找到“熱”腫瘤熱情好客的原因，或許就能破除“冷”腫瘤的冷。
編輯神叨叨
這個研究絕對還有後續重磅，8萬個細胞不是白測的~~