導讀
血管內皮細胞（endothelial cell， EC）是襯於心，血管和淋巴管腔內表面的一種單層扁平上皮細胞。EC極薄，厚度約為0。1～1μm，長約25～50μm，寬約10～15μm，在體內呈梭形，相鄰細胞之間借少量粘合質彼此嵌合，細胞長軸與血流方向平行。本文主要介紹幾種血管內皮細胞的分離方法。
詳情 ↓
1、酶消化法大血管內皮細胞的分離
人臍帶動、靜脈(或其它大血管)
a。 在37℃水浴中，預熱培養用的所有無菌溶液，備用。
b。 在無菌條件下，取健康產婦分娩後新鮮的嬰兒臍帶（25cm左右，不超過6h），選擇無夾痕、無扭曲、無凝血阻塞的部分，放入含有100 U/ml的青黴素和100 μg/ml鏈黴素的D-Hanks液中，在臍靜脈或臍動脈的兩端插入磨平的注射器針頭用絲線紮緊，用注射器從一端注入D-Hanks液沖洗血管，直到流出的液體無血跡。
c。 注入0。1%膠原酶（1型）溶液，待血管內殘留的D-Hanks液流盡後，用注射器封注另一端針頭，繼續注入膠原酶溶液，致血管充盈，放入37℃無菌的D-Hanks液中，消化15min後取出。
d。 收集血管內酶溶液，並且注入含20%小牛血清的M199培養液（pH 7。2）沖洗血管收集合並於同一容器內，以1000r/min離心7～10min。
e。 去上清液，加入20%小牛血清的M199培養液重新懸浮細胞備用。
f。 其它大血管如牛主動脈，豬主動脈等，可在無菌下分離，然後用線結紮血管各分支，再依上述步驟分離EC。
2、酶消化法小血管內皮細胞的分離
兔主動脈，大鼠主動脈因血管較小，分支極細，不能採用上述方法消化。
a。 將動物主動脈取出後放D-Hanks中，將血管外的脂肪細組織分離乾淨，用絲線結紮血管一端，然後用探針頂住該端，將整條血管翻轉，使內膜翻在外面。將另一端折入腔內0。5cm，並用絲線結紮緊，以防外膜外露及避免酶液進入外膜腔內。
b。 用D-Hanks液清洗乾淨外翻的內膜面，然後血管浸泡在含0。1%膠原酶溶液的小瓶內，蓋上瓶蓋在37℃水浴中輕輕搖盪消化，使EC離散下來，消化15～20min後，見酶液稍有混濁，即加入等量的含20%小牛血清的M199培養液，以終止酶的作用。
c。 收集消化後的酶溶液以1500r/min離心5min，棄上清，用20%小牛血清M199培養液重新懸浮細胞。
3、酶消化——機械刮脫法豬主動脈EC的分離
a。 麻醉狀態下，在頸部切口，分離並剪斷頸動脈，放血處死。在無菌條件下，作胸腹聯合切口，迅速開啟胸腔，分離並取出胸主動脈和腹主動脈，置含D-Hanks液的培養皿中，儘量去除血管外膜的脂肪和纖維組織，然後用D-Hanks液多次沖洗血管外表及血管管腔內的凝血，再放入新裝有D-Hanks的溶液中。
b。 縱何剪開血管，反覆沖洗乾淨血管內壁後，在另一無菌大培皿中，滴加薄薄一層0。125%胰蛋白酶和0。01% EDTA的混合消化液，將主動脈內膜面朝下鋪在酶混合液之上。在37℃條件下，讓內膜與酶溶液充分接觸並消化10～20min，再加入含少量20%小牛血清的M199培養液，以終止酶的作用。
c。 把上述主動脈移至另一無菌培養皿，用小手術刀輕輕將內皮刮下。先順向有次序地刮內膜1～2次，然後再橫向刮1～2次，用M199液將內皮細胞收集到離心管中，以1000r/min離心7～10min，去上清，用20%小牛血清M199培養液重新懸浮細胞備用。
4、機械刮脫法血管內皮細胞的分離
取長度為20cm的大血管，用D-Hanks液將血管內、外沖洗乾淨後，無菌條件下沿縱軸剪開，使血管內皮朝上向外暴露，再用D-Hanks液沖洗2次，然後用刮刀輕輕刮取內膜表面的內皮細胞，刮取時，動作應輕柔均勻，刮刀與表面的角度約為60℃，每處只能刮1次，不可刮血管的邊緣，刮下的細胞懸浮於M199液中，以1000r/min離心7～10min，去上清，再重複洗滌1次，重新懸浮於20%小牛血清M199培養液中備用。
如何快速完成所有的操作呢？
，時長
00：32
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3-9秒是什麼概念，可能你還沒開啟說明書，實驗已經結束。
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逆境致死細胞？答案：3-9秒
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型組織消融試劑盒：主要適用於脂肪、肺泡、表皮等組織；
B
型組織消融試劑盒：主要適用於心臟、骨、軟骨、甲狀腺等組織；
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型組織消融試劑盒：主要適用於肝臟、脾臟、腎臟、胰臟、大腦、肌肉等組織；
特殊樣品消融試劑盒：針對腸組織、神經組織和視網膜組織等的消融試劑盒。
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